細胞培養小知識，你知道嗎?

　　什么是細胞培養呢?

　　細胞培養是指從動物或植物中取出細胞，然后使其在合適的人工條件下生長。這些細胞可于培養前直接從組織中取出來并采用酶或機械方法進行解離，或者也可來自已經建立的細胞系或細胞株。

　　接下來我們一起跟隨BUNSEN本生了解一些細胞培養中的小技巧：

　　1、冷凍管該如何解凍? 取出冷凍管后，須立即放入37°C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預防冷凍管爆裂。

　　2、細胞冷凍管解凍培養時，是否應馬上去除DMSO? 除少數特別注明對DMSO 敏感的細胞外，絕大部分細胞株(包括懸浮性細胞)，在解凍之后，應直接放入含有10-15ml新鮮培養基的培養角瓶中，待隔天再置換新鮮培養基以去除DMSO 即可，如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附的問題。

　　3、可否使用與原先培養條件不同的培養基? 不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應的細胞培養基，若驟然使用和原先提供的培養條件不同的培養基， 細胞大都無法立即適應，造成細胞無法存活。

　　4、可否使用與原先培養條件不同的血清種類? 不能。血清是細胞培養上一個極為重要的營養來源，所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產生極大的影響。來自不同物種的血清，在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。

　　5、何謂FBS,FCS,CS,HS? FBS(fetal bovine serum)和FCS(fetal calf serum)是相同的意思，兩者都是指胎牛血清，FCS乃錯誤的使用字眼，請不要再使用。CS(calf serum)則是指小牛血清。HS(horseserum)則是指馬血清。

　　6、培養細胞時應使用5%或10%CO2?或根本沒有影響? 一般培養基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統，而培養基中NaHCO3 的含量將決定細胞培養時應使用的CO2濃度。當培養基中NaHCO3含量為每公升3.7g時，細胞培養時應使用10%CO2;當培養基中NaHCO3為每公升1.5g時，則應使用5%CO2培養細胞。

　　7、何時須更換培養基? 視細胞生長密度而定，或遵照細胞株基本數據上之更換時間，按時更換培養基即可。

　　8、培養基中是否須添加抗生素? 除于特殊篩選系統中外，一般正常培養狀態下，培養基中不應添加任何抗生素。

　　9、附著性細胞繼代時所使用的trypsin-EDTA濃度?應如何處理? 一般使用的trypsin-EDTA濃度為0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。*次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中，保存于-20°C，避免反復冷凍解凍造成trypsin 的活性降低，并可減少污染的機會。

　　10、懸浮性細胞應如何繼代處理? 一般僅需持續加入新鮮培養基于原培養角瓶中，稀釋細胞濃度即可，若培養液太多時，可將培養角瓶口端稍微抬高，直到無法容納為止。分瓶時取出一部份含細胞之培養液至另一新的培養角瓶，加入新鮮培養基稀釋至適當濃度，重復前述步驟即可。

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