做ELISA實驗，事先收集好的標本需如何處理?

　　做ELISA實驗，在處理樣本應該先了解收集樣本的注意事項。

　　【標本收集注意事項】

　　1.收集血液的試管應為一次性的無熱原，無內毒素試管。

　　2.血清和血漿避免使用溶血，高血脂標本。

　　3.標本應清澈透明，懸浮物應離心去除。

　　4.標本收集后若不及時檢測，需按一次使用量分裝，凍存于-20℃，-80℃電冰箱內，避免反復凍融。

　　5.可根據標本的實際情況，做適當倍數稀釋(建議做預實驗，以確定稀釋倍數) 。

　　6.收集標本，盡量做到雙份的用量，避免一次實驗失敗，重復實驗時標本缺失，從而耽誤實驗進程。

　　7.收集標本時，應該做好防護措施(比如戴手套，口罩，護目鏡等)，認為所有標本都具有一定的潛在危險性。

　　8.樣本處理應該在生物安全柜里面，并且正確使用生物安全柜。

　　樣本正確的處理方法應該是這樣的：

　　【標本處理辦法】

　　1.血清：將采集的全血靜置冰箱4℃過夜，然后1000-3000rpm離心10分鐘，取上清立即測試，暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。

　　2.血漿：用EDTA，枸櫞酸鈉，肝素等作為抗凝劑，加入血液混勻后，1000-3000rpm離心10分鐘，取上清立即測試，暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。

　　3.組織勻漿：切取組織塊，0.01MPBS中過洗一次;按照1G組織加入5-10ml組織蛋白萃取試劑的比例，在冰水中勻漿。勻漿完成后，5000-10000rpm離心10分鐘，取上清立即測試，暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。

　　4.細胞培養上清：1000-3000rpm離心10分鐘，取上清立即測試，暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。

　　5.尿液，腹水，腦脊液等：1000-3000rpm離心10分鐘，取上清立即測試，暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃3-6個月)保存。

　　注：樣品稀釋的一般原則

　　用戶須查閱相關文獻了解標本內待測因子的含量，決定適當的稀釋倍數，以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA試劑盒的檢測范圍。樣品的稀釋應有詳細記錄。

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