ELISA實驗中標曲和樣本的顯色問題

　　以下是天津本生ELISA實驗中關于 ?標曲和樣本顯色問題? 的常見原因及解決方案，綜合多篇文獻分析整理：

　　一、標曲不顯色或顯色弱，樣本正常

　　標準品溶解不充分?

　　溶解時未渦旋震蕩，導致標準品未溶解或稀釋不均。

　　解決?：使用渦旋震蕩器充分混勻標準品及稀釋液。

　　孵育條件不當?

　　靜置孵育導致抗原抗體接觸不充分，建議使用微孔板振蕩器(37℃)。

　　試劑漏加或失效?

　　可能漏加檢測抗體、酶標試劑，或試劑因反復凍融失活。

　　解決?：分裝保存試劑，操作時標記步驟避免遺漏。

　　二、標曲和樣本均不顯色

　　系統性問題?

　　酶標試劑(如HRP)失活、底物(TMB)污染或過期。

　　解決?：更換新鮮底物，檢查試劑保存條件(避光、防潮)。

　　操作失誤?

　　未按說明書步驟操作(如漏加關鍵組分)。

　　解決?：嚴格遵循操作流程，新手建議使用帶染料的試劑盒輔助驗證。

　　三、標曲顯色正常，樣本不顯色

　　樣本濃度過低?

　　目標蛋白濃度低于檢測限，或樣本類型(如血漿、細胞上清)不匹配。

　　解決?：嘗試高敏ELISA試劑盒或濃縮樣本。

　　樣本干擾物質?

　　溶血、細菌污染、類風濕因子等導致假陰性。

　　解決?：離心去除雜質，添加蛋白酶抑制劑或稀釋樣本。

　　四、顯色過強或無梯度

　　洗滌不凈

　　殘留HRP酶催化底物過度顯色，尤其是TMB前最后一次洗滌。

　　解決?：確保洗液注滿孔，拍干液體，手動洗板時更換吸水紙。

　　底物孵育時間過長?

　　TMB顯色超過15分鐘可能導致OD值飽和。

　　解決?：顯色10-15分鐘后及時終止(最高濃度孔出現深藍色即可)。

　　五、其他注意事項

　　移液精度?：定期校準移液器，避免加樣誤差。

　　環境控制?：避免底物(TMB)提前氧化(如避光保存)。

　　對照設置?：陰陽性對照可幫助區分系統誤差與樣本問題。

　　通過規范操作和針對性排查，可顯著改善顯色異常問題。

　　注：以上資料僅供參考，不作為實驗依據，具體請咨詢技術老師或產品品牌供應商。

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