ELISA雙抗體夾心法有哪些常見問題?

　　以下是ELISA雙抗體夾心法實驗中常見問題的系統分析及解決方案，本生技術小編結合多來源信息整理：

　　一、樣本相關異常?

　　假陽性/高背景?

　　原因?：血液溶血或纖維蛋白未清除，血紅蛋白干擾顯色?

　　對策?：3000rpm離心15min，取上清檢測，避免溶血樣本?

　　稀釋線性異常?

　　現象?：樣本孔OD值超出標準曲線范圍(>2.0或<0.1)?

　　調整?：按10倍梯度稀釋重測，確保OD值在0.1-1.5區間?

　　二、操作技術問題?

　　洗滌不充分?

　　表現?：整板均勻顯色(花板)或復孔CV>20%?

　　優化?：洗板5次，每次拍板后更換吸水紙，避免交叉污染?

　　孵育條件失控?

　　溫度?：超過37℃導致非特異性結合增加(建議恒溫箱校準)?

　　時間?：超過說明書建議時間(通常抗原孵育≤1小時)?

　　三、試劑與設備問題?

　　抗體配對不當?

　　影響?：鉤狀效應(高濃度樣本假陰性)?

　　驗證?：通過棋盤滴定確定最佳抗體濃度比?

　　底物失效?

　　判斷?：陽性對照孔顯色淺或無色?

　　處理?：現配現用TMB，避光保存，避免金屬離子污染?

　　四、數據分析異常?

　　標準曲線擬合不佳?

　　指標?：R2<0.99或低濃度點偏離?

　　措施?：檢查標準品溶解是否充分，復孔重復性?

　　靈敏度不足?

　　標準?：最高濃度孔OD值應>1.0?

　　提升?：延長封閉時間(2小時)或更換高親和力抗體?

　　注：以上資料僅供參考，如需進一步了解產品詳情，可參考品牌供應商或技術老師。

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