Elisa實驗：如何判斷樣本是否需要稀釋?

　　在ELISA實驗中，判斷樣本是否需要稀釋是確保檢測結果準確可靠的關鍵步驟。以下是核心判斷原則和操作流程：

　　核心判斷原則

　　目標分子濃度預判?

　　高濃度樣本?(如血清IgG、疫苗抗體、純化重組蛋白)：通常需要高倍稀釋(如1:100~1:1000)，以避免“鉤狀效應"(過量抗原導致信號值反常降低)?。

　　低豐度樣本?(如細胞因子、神經營養因子)：建議稀釋倍數≤1:10或直接使用原液檢測?。

　　試劑盒性能匹配?

　　稀釋后樣本的OD值應落在標準曲線最高值OD值的半量程內(例如標準品最高OD=2.4時，目標OD≈1.2)，此時計算誤差最小?。

　　標準曲線范圍需覆蓋樣本預期濃度，否則需調整稀釋比例?。

　　實驗設計需求?

　　橫向比較實驗需統一所有樣本的稀釋倍數，消除基質差異?。

　　時間梯度實驗可根據預期濃度變化預設差異稀釋方案(如0h 1:10，24h 1:100)?。

　　操作流程

　　預實驗與梯度稀釋?

　　對未知濃度樣本進行初步稀釋(如1:10、1:100、1:1000)，檢測OD值?。

　　選擇使OD值接近標準曲線中高濃度點(如OD≈1.2)的稀釋倍數?。

　　驗證鉤狀效應?

　　若高稀釋倍數樣本OD值高于低稀釋倍數，提示存在鉤狀效應，需進一步稀釋?。

　　重復性與精確度評估?

　　復孔檢測CV%應<20%，若差異大需排查加樣誤差或污染?。

　　常見問題處理

　　假陽性?：類風濕因子干擾樣本可加熱滅活(100℃ 1分鐘)?。

　　信號異常?：溶血樣本需棄用，EDTA濃度需<5 mM?。

　　通過以上原則和流程，可精準判斷樣本稀釋需求，確保檢測結果落在標準曲線線性范圍內?。

　　注：以上僅供參考，不作為實際數據，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。

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