以下是關(guān)于人第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)ELISA試劑盒的實驗使用說明綜合指南：

　　BS-0195  人第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)ELISA試劑盒

　　一、實驗原理

　　采用雙抗體夾心法檢測樣本中FⅧAg含量。具體步驟為：

　　用純化抗體包被微孔板形成固相抗體

　　依次加入待測樣本和HRP標(biāo)記抗體

　　形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物后，TMB顯色系統(tǒng)產(chǎn)生顏色反應(yīng)

　　二、試劑盒組成

　　典型配置包含(不同品牌可能略有差異)：

　　酶標(biāo)包被板(96T/48T)

　　FⅧAg標(biāo)準(zhǔn)品(通常含40μg/ml原液)

　　酶標(biāo)試劑(HRP標(biāo)記抗體)

　　顯色液(TMB A/B液)

　　終止液(酸性溶液)

　　20×濃縮洗滌緩沖液

　　三、樣本要求

　　適用樣本類型：人血清、血漿及相關(guān)液體樣本

　　保存要求：

　　新鮮樣本需立即檢測

　　凍結(jié)樣本應(yīng)充分混勻后使用

　　避免反復(fù)凍融和細(xì)菌污染

　　四、操作步驟

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?：用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液進行梯度稀釋

　　加樣?：

　　每孔加入100μl標(biāo)準(zhǔn)品或樣本

　　37℃溫育90分鐘

　　洗滌?：棄液體后用洗滌液洗板5次

　　加酶標(biāo)抗體?：每孔加100μl HRP標(biāo)記抗體

　　顯色?：

　　加入TMB顯色液(A+B液等體積混合)

　　避光反應(yīng)15-30分鐘

　　終止?：每孔加50μl終止液

　　檢測?：450nm波長讀取OD值

　　五、結(jié)果計算

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

　　通過回歸方程計算樣本濃度(需乘以稀釋倍數(shù))

　　六、注意事項

　　試劑使用前需平衡至室溫(25-37℃)

　　嚴(yán)格避免：

　　不同批次試劑混用

　　顯色液接觸金屬器具

　　酶標(biāo)板干燥

　　質(zhì)量控制：

　　建議所有樣本做雙孔檢測

　　每板設(shè)置空白對照

　　安全防護：

　　避免直接接觸終止液和顯色液

　　禁止用嘴吸取試劑

　　七、儲存條件

　　未開封試劑盒應(yīng)保存于2-8℃;開封后酶標(biāo)板需密封保存并添加干燥劑。

　　(注：具體操作參數(shù)請以實際試劑盒說明書為準(zhǔn)，不同廠家可能存在差異，以上資料僅供參考，具體請咨詢技術(shù)老師及供應(yīng)商)。

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