微生物艱難梭菌毒素A(TCD-A)ELISA試劑盒技術(shù)使用說明書

　　BS-5181 微生物艱難梭菌毒素A(TCD-A)ELISA試劑盒

　　實(shí)驗(yàn)原理

　　本試劑盒采用雙抗體夾心法檢測樣本中TCD-A濃度，通過預(yù)包被的抗TCD-A單抗捕獲抗原，結(jié)合生物素標(biāo)記的二抗及HRP酶偶聯(lián)物，經(jīng)TMB底物顯色后，在450nm波長下測定吸光度，濃度與OD值呈正相關(guān)。

　　操作流程

　　樣本處理

　　糞便樣本：取0.2g糞便加入0.5ml稀釋液，混勻后離心(2000rpm，10分鐘)，取上清檢測。

　　細(xì)胞培養(yǎng)上清：直接檢測或稀釋后使用，避免反復(fù)凍融。

　　試劑準(zhǔn)備

　　洗滌液：20倍濃縮液用蒸餾水稀釋至1倍。

　　標(biāo)準(zhǔn)品：4000pg/ml母液按梯度稀釋(2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、0 pg/ml) 。

　　檢測步驟

　　加樣：標(biāo)準(zhǔn)品/樣本(50μl/孔)與檢測抗體溫育1小時(shí)。

　　顯色：TMB底物避光反應(yīng)15分鐘，2M硫酸終止。

　　讀數(shù)：酶標(biāo)儀450nm波長測定，標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度。

　　關(guān)鍵注意事項(xiàng)

　　樣本要求：糞便樣本需新鮮采集，避免溶血或污染;細(xì)胞上清需離心去除顆粒物。

　　試劑穩(wěn)定性：未拆板條2-8℃保存，標(biāo)準(zhǔn)品溶解后需分裝凍存。

　　質(zhì)量控制：建議設(shè)置復(fù)孔，回收率應(yīng)達(dá)80-120%。

　　安全防護(hù)：處理糞便樣本需按生物安全規(guī)范操作。

　　數(shù)據(jù)分析

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線需滿足R2≥0.99，典型靈敏度為7pg/ml，檢測范圍31.25-2000pg/ml

　　注：以上僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。

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