人白介素6(IL-6)ELISA檢測試劑盒說明書

　　BS-0049 人白介素6(IL-6)ELISA檢測試劑盒

　　1. 目的?

　　本試劑盒用于定量檢測人血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液及組織勻漿樣本中白介素6(IL-6)的濃度。本檢測為科研提供數(shù)據(jù)，供參考。

　　2. 實(shí)驗(yàn)原理?

　　采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)：

　　捕獲抗體?：抗人IL-6單抗預(yù)包被于微孔板，形成固相抗體層。

　　抗原結(jié)合?：樣本中IL-6與捕獲抗體結(jié)合，再加入生物素化檢測抗體，形成“抗體-抗原-酶標(biāo)抗體"復(fù)合物。

　　顯色反應(yīng)?：加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的鏈霉親和素，催化底物TMB顯色(藍(lán)色→黃色)，顏色深淺與IL-6濃度正相關(guān)，450nm波長下測定吸光度(OD值)。

　　3. 試劑盒組成?

　　酶標(biāo)板?：96孔/48孔預(yù)包被抗IL-6抗體。

　　標(biāo)準(zhǔn)品?：6個梯度濃度(0、3、6、12、24、48 pg/mL)，凍干粉保存。

　　檢測抗體?：生物素化抗IL-6抗體，2-8℃避光保存。

　　酶結(jié)合物?：HRP標(biāo)記鏈霉親和素，避光保存。

　　底物液?：TMB顯色液，避光保存。

　　終止液?：2M硫酸，終止顯色反應(yīng)。

　　洗滌液?：20×濃縮液，需稀釋使用。

　　樣本稀釋液?：10×濃縮液，用于樣本預(yù)處理。

　　封板膜?：密封酶標(biāo)板，防止蒸發(fā)。

　　說明書?：詳細(xì)操作流程及注意事項(xiàng)。

　　4. 樣本處理?

　　血清/血漿?：室溫凝固10-20分鐘，離心(2000-3000轉(zhuǎn)/分，20分鐘)收集上清，避免溶血。

　　細(xì)胞上清?：離心去除細(xì)胞碎片，檢測分泌性IL-6。

　　組織勻漿?：PBS稀釋至細(xì)胞濃度約100萬/mL，反復(fù)凍融釋放細(xì)胞內(nèi)成分，離心取上清。

　　保存?：2-8℃短期(≤48小時(shí))或-20℃/-70℃長期保存，避免反復(fù)凍融。

　　禁忌?：避免含NaN3樣本，因NaN3抑制HRP活性。

　　5. 操作步驟?

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?：凍干標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水復(fù)溶，梯度稀釋至0-48 pg/mL。

　　加樣?：

　　標(biāo)準(zhǔn)品孔：各加50μL不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品。

　　樣本孔：加40μL樣本稀釋液+10μL樣本(5倍稀釋)。

　　空白孔：不加樣本及酶標(biāo)試劑。

　　溫育?：37℃孵育60分鐘，封板膜密封。

　　洗滌?：甩干孔內(nèi)液體，用洗滌液浸泡10-30秒，重復(fù)3-5次。

　　加酶標(biāo)試劑?：每孔加100μL HRP標(biāo)記抗體，37℃孵育30分鐘。

　　顯色?：加100μL TMB底物，避光顯色15分鐘。

　　終止?：加100μL終止液，藍(lán)色變黃色，30分鐘內(nèi)測OD值。

　　6. 結(jié)果計(jì)算?

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線?：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度(pg/mL)為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪制曲線。

　　樣本濃度?：根據(jù)樣本OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得IL-6含量，乘以稀釋倍數(shù)。

　　注意事項(xiàng)?：

　　預(yù)實(shí)驗(yàn)確定樣本稀釋倍數(shù)，確保OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)。

　　避免氣泡產(chǎn)生，輕柔混勻標(biāo)準(zhǔn)品。

　　顯色底物避光保存，終止液順序與顯色一致。

　　7. 性能指標(biāo)?

　　靈敏度?：低檢測濃度<0.1 pg/mL。

　　特異性?：僅識別人IL-6，不與其他細(xì)胞因子交叉反應(yīng)。

　　重復(fù)性?：板內(nèi)、板間變異系數(shù)<10%。

　　8. 注意事項(xiàng)?

　　試劑保存?：2-8℃避光，有效期6個月，勿使用過期試劑。

　　操作規(guī)范?：

　　避免接觸微孔板內(nèi)壁，防止污染。

　　洗板時(shí)充分浸泡，提高洗滌效果。

　　顯色反應(yīng)避光，終止液充分混勻。

　　樣本限制?：不可檢測NaN3樣本。

　　9. 儲存條件?

　　未開封試劑盒：2-8℃保存。

　　開封后：按組分說明分裝保存，避免反復(fù)凍融。

　　注：以上僅供參考，本試劑僅供科研使用，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。

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